Zeharkako ELISA metodo bat garatzea txerrien beherakoaren sindrome akutua koronavirusaren IgG antigorputza detektatzeko punta-proteina birkonbinatuan oinarrituta.

Txerriaren Beherakoa Akutuaren Sindromearen koronabirusa (SADS-CoV) aurkitu berri den txerri koronavirus patogeno enteriko bat da, txerri jaioberrietan beherako urtsua eragin dezakeena eta txerri industrian galera ekonomiko handiak eragin ditzakeena.Gaur egun, ez dago metodo serologiko egokirik SADS-CoV infekzioaren eta txertoaren eraginkortasuna ebaluatzeko, eta, beraz, premiazkoa da entzimekin lotutako immunosorbent test (ELISA) eraginkorra erabiltzea gabezia hori osatzeko.Hemen, giza IgG Fc domeinuarekin fusionatutako SADS-CoV piko (S) proteina adierazten duen plasmido birkonbinatzailea eraiki zen baculobirus birkonbinatzailea sortzeko eta HEK 293F zeluletan adierazita.S-Fc proteina G proteina erretxinarekin araztuta dago eta giza Fc eta SADS-CoV antigorputzekiko erreaktibotasuna mantentzen du.Ondoren, S-Fc proteina erabili zen zeharkako ELISA (S-iELISA) garatzeko eta S-iELISAren erreakzio-baldintzak optimizatzeko.Ondorioz, immunofluoreszentzia entseguaren (IFA) eta Western blotting bidez baieztatutako 40 SADS-CoV suero negatiboen OD450nm balioa aztertuz, ebaki-balioa 0,3711 zela zehaztu zen.S-iELISA-ren exekuzioen barruan eta tartean 6 SADS-CoV suero positiboen aldakuntza koefizientea (CV) % 10 baino txikiagoa izan zen.Erreaktibotasun gurutzatuaren probak erakutsi zuen S-iELISAk ez duela beste txerri birusen serumekiko erreaktibotasun gurutzaturik.Horrez gain, 111 serum lagin kliniko detektatuta, IFA eta S-iELISAren kointzidentzia-tasa orokorra % 97,3koa izan zen.Birusak neutralizatzeko probak serumaren 7 OD450nm balio ezberdinekin erakutsi zuen S-iELISAk detektaturiko OD450nm balioa birusaren neutralizazio probarekin positiboki erlazionatuta zegoela.Azkenik, S-iELISA txerri-haztegiko 300 serum laginetan egin zen.Beste txerri enterobirus batzuen kit komertzialak erakutsi zuten SADS-CoV, TGEV, PDCoV eta PEDVren IgG positiboak % 81,7, % 54 eta % 65,3 izan zirela, hurrenez hurren., %6, hurrenez hurren.Emaitzek erakusten dute S-iELISA espezifikoa, sentikorra eta errepikagarria dela, eta txerri industrian SADS-CoV infekzioa detektatzeko erabil daitekeela.Artikulu hau copyright bidez babestuta dago.Eskubide guztiak erreserbatuak.